Bài giảng Sinh học 12 (Kết nối tri thức) - Bài 6: Thực hành Tách chiết DNA

Nội dung tài liệu: Bài giảng Sinh học 12 (Kết nối tri thức) - Bài 6: Thực hành Tách chiết DNA

1. Bài 6. THỰC HÀNH: TÁCH CHIẾT DNA
2. I. Tách chiết DNA
3. HƯỚNG DẪN TÌM HIỂU Quy trình dưới đây mô tả các bước tách chiết DNA với mẫu vật là gan gà. Bước 1: Nghiền khoảng 5 g gan gà, cho thêm khoảng 150 mL nước lạnh vào, khuấy đều. Lấy 1/4 quả dứa đã gọt vỏ, ép lấy nước đổ vào một ống nghiệm. Bước 2: Lọc dung dịch qua phễu lọc, chỉ lấy dịch nước trong. Bước 3: Cho dịch lọc vào trong một ống nghiệm khác cùng với 30 mL nước rửa bát pha loãng, khuấy đều, sau đó để yên khoảng 5 – 10 phút. Bước 4: Rót hỗn hợp từ bước 3 sang ống nghiệm mới với thể tích dịch khoảng 1/3 đến 1/2 ống nghiệm; bổ sung 5 mL nước dứa tươi vào ống nghiệm và khuấy nhẹ rồi để yên trong khoảng 10 phút. Bước 5: Ống nghiệm lấy từ bước 4 được đổ thêm cồn ethanol. Sau ít phút, DNA được kết tủa sẽ nổi lên ở lớp cần phía trên ống nghiệm. Dùng tăm tre hoặc đũa thuỷ tinh quấn lấy DNA và đưa ra khỏi ống nghiệm.
4. BÁOHƯỚNG CÁO KQDẪN THÍ TÌM NGHIỆM HIỂU 1. Mục đích thực hiện thí nghiệm. Thực hành tách chiết được DNA từ các mẫu vật có sẵn. 2. Kết quả và giải thích a, Kết quả tách chiết và nhận biết DNA: Thu được kết tủa DNA màu trắng. b, Giải thích:
5. BÁOHƯỚNG CÁO KQDẪN THÍ TÌM NGHIỆM HIỂU b, Giải thích: Do DNA tồn tại trong nhân tế bào nên để tách chiết được DNA ra khỏi tế bào, cần phá vỡ mô để tách rời các tế bào và phá huỷ thành tế bào bằng việc nghiền mẫu vật; phá huỷ màng tế bào, màng nhân bằng các dung dịch tẩy rửa hoà tan lipid. Trong tế bào, DNA liên kết với nhiều protein nên cần loại bỏ các protein bằng enzyme phân giải protein là protease (có trong nước ép dứa tươi), dung dịch lúc này chỉ còn DNA và RNA. Để tách DNA ra khỏi dung dịch chiết xuất, cần kết tủa DNA bằng ethanol. Vì ethanol nhẹ hơn nước, nên ethanol sẽ nổi lên trên cùng với DNA kết tủa.
6. BÁOHƯỚNG CÁO KQDẪN THÍ TÌM NGHIỆM HIỂU 3. Kết luận - Tách chiết DNA là quy trình cơ bản trong nghiên cứu sinh học, tuy nhiên cần phải thao tác cẩn thận và chặt chẽ để có thể thu được DNA chất lượng tốt, tránh nhiễm các DNA bên ngoài để phục vụ cho các nghiên cứu tiếp theo. - Cần lưu ý các điểm sau để thu được kết quả tốt hơn: + Đeo bao tay và mặc đồ bảo hộ cẩn thận do DNA rất dễ bị nhiễm gây ra các sai sót cho các thí nghiệm tiếp theo. + Chọn lựa mẫu vật tốt, lưu trữ và xử lý đúng cách trước khi bắt đầu quá trình tách chiết. + Khi nghiền mẫu cần phải nghiền kỹ, đảm bảo các mô và thành tế bào đều bị phá vỡ. + Lựa chọn dung dịch tách chiết phù hợp với loại mẫu và ứng dụng cụ thể. + Sau khi tách chiết DNA, thực hiện các bước làm sạch để loại bỏ tạp chất (protein, RNA) có thể ảnh hưởng đến thí nghiệm tiếp theo. + Kiểm tra và đánh giá hiệu suất tách chiết bằng cách sử dụng các phương pháp như đo OD, điện di trên gel agarose, PCR,...